Agaroza prahje organska supstanca sa hemijskom formulom c24h38o19. To je bijela ili žuta kuglica poput čestica gela ili praha, koja je linearni polimer, a osnovna struktura je 1,3 vezana - D-galaktoza i 1,4-povezana 3,6-endoeter-l-galaktoza su naizmjenično povezani.
Agar pektin je heterogena mješavina sastavljena od mnogo manjih molekula. Agaroza se općenito zagrijava na iznad 90 stepeni da bi se rastvorila u vodi, a kada temperatura padne na 35-40 stepeni, formira dobar polučvrsti gel, što je glavna karakteristika i osnova njene različite upotrebe. Učinak agaroznog gela obično se izražava jačinom gela. Što je veća čvrstoća, to su bolje performanse gela.
Agarose Powder, skraćeno Ag, je nenabijena neutralna komponenta agara, također prevedena kao agaroza ili agaroza. Hemijska struktura agaroze je povezana 1,3 - D-galaktozom i 1,4-povezanom 3,6-endoeter-l-galaktozom su naizmjenično povezani.
Agaroza je izvedena iz polisaharida crvenih algi, a njena glavna komponenta je poligalaktoza, od čega je oko 70% agaroze i 30% agaroze razgranatog lanca. Agaroza ima linearnu strukturu i prolaze je preko D-galaktoze i 3,6-dehidrirane galaktoze - 1, 4 i - 1, 3 spoja naizmjenično formiraju disaharidne jedinice koje se ponavljaju. Agaroza razgranatog lanca je ekstrahirana iz - 1, 3 veze razdvajaju drugi lanac. Materijal ekstrahovan iz morskih algi vrelom vodom sadrži oko 40% agara. Komercijalno dostupan agar (obično poznat kao agar) često je u obliku lista ili labavog užeta i obično se koristi kao jestiva guma, sredstvo za pakovanje lijekova ili medij za bakterijsku kulturu. Čista agaroza se često koristi u biohemijskim laboratorijama kao polučvrsta podloga u elektroforezi, kromatografiji i drugim tehnologijama za odvajanje i analizu bioloških makromolekula ili malih molekula.
Proces proizvodnje agaroze može se podijeliti u četiri dijela: predtretman, ekstrakcija, tretman DEAE celuloze i dehidracija
1) Prethodno obrađene praškaste sirovine se direktno suše na 80C tokom 1/2 h. sirovine trake i blokova se isperu vodom, iseku na male komade i peku
2) Ekstrakcija: nakon nekoliko sati miješanja i ekstrakcije sa otopinom estera miješanog natrijevog acetata octene kiseline, odsisati vodu, isprati, zatim promiješati i ekstrahirati puferskom otopinom natrijum karbonata natrijum bikarbonata nekoliko sati, a zatim pumpati, filtrirati i isprati vodom
3) Agar gel ekstrahovan puferskim rastvorom se rastvori u 4% rastvoru zagrevanjem sa vodom, a zatim se doda DEAE celuloza za mešanje 3-4 h uz toplotno čuvanje, a zatim centrifugira. Filtrat se sakuplja i filtrira kako bi se dobila bijela otopina u koloidnom stanju
4) Dehidracija: nakon zagrevanja bijelog filtrata brzo dodati 95% etanol uz miješanje dok ne dođe do očiglednih taloga, ohladiti na sobnu temperaturu, izliti gornji sloj otopine, isprati i osušiti talog da se dobije proizvod, sa prinosom od 71%
Obnavljanje reagensa Obnavljanje DEAE celuloze: nakon centrifugiranja, talog se prokuva sa vodom, filtrira na svilenoj tkanini od 100 mesh, ponavlja nekoliko puta dok filtrat ne postane bistar, zatim se ispere sa 0,5 mol/1 HCl, 0,5 mol/1 NaOH i vodom i osuši. Stopa oporavka je 95% Frakcija na 80 C je sakupljena direktnom destilacijom etanolne vodene otopine dobijene iz Yichun vodene otopine. Zatim dodajte čvrsti natrijum hlorid do zasićenja i nastavite sa destilacijom . 70% može se napuniti. Nakon što natrijum hlorid u boci ispari, može se puniti i ventilom.
Agarose Powderje polisaharid ekstrahovan iz morskih algi i glavna je komponenta agara. Od svog otkrića, široko se koristio u mnogim poljima zbog svojih jedinstvenih fizičkih i hemijskih svojstava, kao što su sposobnost formiranja gela, termička stabilnost, hemijska stabilnost i biokompatibilnost. U nastavku slijedi detaljno objašnjenje njegove namjene:
Elektroforeza u agaroznom gelu jedna je od najčešće korištenih tehnika razdvajanja i analize u molekularnoj biologiji. Kao medij gel elektroforeze, agaroza ima prednosti velike veličine pora, širokog raspona razdvajanja i jednostavnog rada. U procesu elektroforeze, biološke makromolekule poput DNK, RNK ili proteina migriraju kroz pore agaroznog gela pod djelovanjem električnog polja. Zbog razlika u naboju, veličini i obliku različitih molekula, njihova brzina migracije u gelu je različita, čime se postiže razdvajanje. Agarozna gel elektroforeza se široko koristi u kloniranju gena, analizi genske ekspresije i detekciji mutacija gena. Obično se koristi kao podrška ili matrica u ćelijskoj kulturi. Zbog svoje odlične biokompatibilnosti i hemijske stabilnosti, agaroza može da obezbedi stabilno okruženje za rast ćelija. Na primjer, u eksperimentu formiranja kolonija na mekom agaru, agaroza se koristi za pripremu polu-čvrstog medija za kulturu za otkrivanje sposobnosti ćelija formiranja kolonija, što je od velikog značaja za procjenu stepena maligne transformacije ćelija.
Osim toga, agaroza se također može kombinirati s drugim biomaterijalima za pripremu kompozitnih materijala za upotrebu u tkivnom inženjerstvu i regenerativnoj medicini. Agarozni gel također igra važnu ulogu u imunodifuziji i imunoelektroforezi. U ovim tehnologijama, agarozni gel, kao medij reakcije antigena i antitijela, može formirati jasne precipitacijske linije ili prstenove, koji se mogu koristiti za otkrivanje i analizu prisutnosti i koncentracije antigena ili antitijela. Veličina pora i svojstvo naboja agaroznog gela mogu uticati na brzinu difuzije i efikasnost vezivanja antigena i antitijela, tako da se eksperimentalni uvjeti mogu optimizirati podešavanjem koncentracije i vrste agaroze.
Primjena u eksperimentima molekularne biologije
Elektroforeza u agaroznom gelu ne može se koristiti samo za razdvajanje DNK i RNK, već se može kombinirati s drugim tehnologijama kako bi se postiglo njihovo pročišćavanje. Na primjer, u procesu ekstrakcije DNK, elektroforeza u agaroznom gelu može se koristiti za otkrivanje integriteta i čistoće DNK, a zatim se ciljni DNK segment može odvojiti od gela rezanjem i obnavljanjem gela. Ova metoda ima prednosti jednostavnog rada i visoke stope oporavka. U eksperimentima hibridizacije nukleinske kiseline, agarozni gel se može koristiti kao nosač čvrste faze za fiksiranje DNK ili RNK sondi na gel, a zatim hibridizirati sa označenom ciljnom nukleinskom kiselinom. Detekcijom prisustva i intenziteta hibridizacijskih signala može se odrediti prisustvo i koncentracija ciljnih nukleinskih kiselina.
Veličina pora i svojstvo naboja agaroznog gela mogu uticati na efikasnost vezivanja sonde i ciljne nukleinske kiseline, tako da se uslovi hibridizacije mogu optimizovati podešavanjem koncentracije i tipa agaroze. Lančana reakcija polimerazom (PCR) je jedna od najčešće korištenih tehnika u molekularnoj biologiji za pojačavanje DNK. U analizi PCR proizvoda, elektroforeza u agaroznom gelu je jedna od najčešće korištenih metoda. Odvajanjem PCR proizvoda putem elektroforeze, veličina i čistoća amplificiranih fragmenata se mogu otkriti, čime se utvrđuje da li je PCR reakcija uspješna i da li postoje ne-nespecifični problemi amplifikacije.
Iako je veličina pora agaroznog gela relativno velika, on nije prikladan za odvajanje malih molekularnih proteina, ali se ipak može koristiti za odvajanje i pročišćavanje proteina u nekim slučajevima. Na primjer, u preparativnoj gel elektroforezi, agarozni gel se može koristiti za odvajanje i pročišćavanje proteina veće molekularne težine. Pored toga, agaroza se takođe može kombinovati sa drugim materijalima za pripremu kompozitnog gela kako bi se proširio opseg odvajanja i poboljšala efikasnost separacije. U nekim eksperimentima za određivanje aktivnosti enzima, agarozni gel se može koristiti kao nosač za imobilizaciju enzima. Imobilizacija enzima na agaroznom gelu može održati aktivnost i stabilnost enzima i olakšati odvajanje i oporavak enzima od reaktanata. Ova metoda ima široku primjenu u području enzimskog inženjerstva.
Primjena u mikrobiologiji
Agaroza se obično koristi kao koagulant u mikrobnim kulturama. U poređenju sa agarom, agaroza ima veću čistoću i manji sadržaj nečistoća, što je čini pogodnijom za mikrobnu kultivaciju. Kada pripremate čvrstu podlogu za kulturu, rastvorite agarozu u vrućoj vodi, zatim dodajte druge hranljive materije i antibiotike i ohladite da se formira čvrsta podloga za kulturu. Ova vrsta medijuma za kulturu može obezbediti stabilno okruženje za rast mikroorganizama, olakšavajući njihovu izolaciju, pročišćavanje i identifikaciju. U eksperimentima mikrobiološke identifikacije, agarozni gel se može koristiti za pripremu specifičnih identifikacionih medija. Na primjer, kada se identificiraju crijevne bakterije, medij za kulturu agaroze koji sadrži specifične šećere može se koristiti za razlikovanje različitih vrsta bakterija promatranjem njihove fermentacije šećera. Osim toga, agarozni gel se također može koristiti za pripremu biokemijskih reakcionih medija za mikroorganizme kako bi se otkrile njihove metaboličke karakteristike i aktivnosti enzima.
Agarose Powderse općenito zagrijava na iznad 90 stepeni da bi se rastvorio u vodi, a kada temperatura padne na 35-40 stepeni, formira dobar polučvrsti gel, što je glavna karakteristika i osnova njegove različite upotrebe. Učinak agaroznog gela obično se izražava jačinom gela. Što je veća čvrstoća, to su bolje performanse gela. Gel agaroze je uzrokovan postojanjem vodoničnih veza. Svaki faktor koji može uništiti vodikove veze može dovesti do uništenja gela. Agaroza je hidrofilna i gotovo potpuno bez nabijenih grupa. Rijetko uzrokuje denaturaciju i adsorpciju osjetljivih bioloških makromolekula. Idealan je inertni nosač. U procesu pripreme agaroze potrebno je što je moguće više ukloniti agar pektin, inače može doći do vrlo male količine sulfata i pirogrožđane kiseline koja će zamijeniti jonizujuću grupu u agarozi, što će uzrokovati elektroosmozu (EEO) i utjecati na kretanje čestica. Sadržaj sulfata u agarozi dobrog kvaliteta je relativno nizak, obično ispod 0,2%, a elektroosmoza je relativno mala, obično ispod 0,13. Zbog toga je agaroza skuplja od agara.
Godine 1937. Araki je prvi put odvojio agarozu od agara, ali tek 1961. godine hjertin je prvi otkrio odlične performanse agaroze, privukao je sve veću pažnju i započeo industrijsku proizvodnju. Agaroza se široko koristi u kliničkim testovima, biohemijskim analizama i odvajanju biomakromolekula.
Agaroza u prahu je osnovno sredstvo u molekularnoj biologiji i biotehnologiji, sa širokim spektrom primjena u gel elektroforezi, afinitetnoj kromatografiji, imunodifuziji i imunoelektroforezi. Njegova jedinstvena svojstva, kao što su jednostavnost upotrebe, svestranost, niska toksičnost i isplativost, čine ga nezamjenjivom komponentom laboratorijskih istraživanja. Uprkos svojim ograničenjima, kao što su ograničena rezolucija i krhkost, nedavni napredak u tehnologiji agaroznog gela, uključujući gelove visoke-gelove visoke rezolucije, pre{4}}izlivene gelove i mikrofluidne uređaje na bazi agaroze{5}}, proširio je njegovu upotrebu i poboljšao njegove performanse. Kako naučna istraživanja budu napredovala, prah agaroze će nesumnjivo ostati vrijedan i bitan reagens u molekularnoj biologiji i biotehnološkom alatu.
Popularni tagovi: agaroza prah cas 9012-36-6, dobavljači, proizvođači, fabrika, veleprodaja, kupovina, cijena, rasuti, prodaja