Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. je jedan od najiskusnijih proizvođača i dobavljača 3xflag peptida cas 402750-12-3 u Kini. Dobrodošli u veleprodaju visokokvalitetnog 3xflag peptida cas 402750-12-3 za prodaju ovdje iz naše tvornice. Dostupne su dobre usluge i razumne cijene.
3XFLAG Peptideje važna sekvenca peptidnog markera koja se široko koristi u ekspresiji proteina i procesima pročišćavanja u biomedicinskim istraživanjima. Molekularna formula C120H169N31O49S, CAS 402750-12-3. Sastavljen od 23 aminokiseline, njegova sekvenca sadrži tri ponovljena Asp Tyr Lys Xaa Xaa Asp motiva, koji mu daju specifične strukturne karakteristike.
Ima dobru rastvorljivost u određenim rastvaračima. Na primjer, u DMSO-u, njegova rastvorljivost je visoka, što ga čini pogodnim za operacije i eksperimente u rastvoru. Osim toga, može postići i dobar efekat rastvaranja u vodi blagim zagrijavanjem. Takođe ima neka posebna svojstva. Na primjer, ima dobru antigenost i reaktivnost i može se vezati za specifična anti FLAG antitijela. Ova sposobnost vezivanja ga čini široko primjenjivim u eksperimentima kao što je imunoprecipitacija. Kompetitivnim vezivanjem za Anti FLAG antitela, protein eksprimiran FLAG fuzijom koji se vezuje za Anti FLAG antitela može se eluirati tokom imunoprecipitacije, čime se postiže lokalizacija, detekcija i prečišćavanje ciljnog proteina.
|
Prilagođeni čepovi i čepovi za boce:
|
|
|
Hemijska formula |
C120H169N31O49S |
|
Tačna masa |
2860 |
|
Molecular Weight |
2862 |
|
m/z |
2861 (100.0%), 2860 (77.0%), 2862 (32.9%), 2862 (31.4%), 2863 (22.1%), 2862 (11.5%), 2863 (10.1%), 2861 (8.8%), 2864 (8.1%), 2862 (7.8%), 2863 (7.4%), 2863 (5.3%), 2863 (4.5%), 2862 (3.5%), 2864 (3.3%), 2864 (3.2%), 2865 (2.2%), 2865 (2.1%), 2864 (2.1%), 2862 (1.9%), 2862 (1.9%), 2861 (1.5%), 2864 (1.5%), 2861 (1.4%), 2864 (1.4%), 2863 (1.2%), 2864 (1.2%) |
|
Elementalna analiza |
C, 50.36; H, 5.95; N, 15.17; O, 27.39; S, 1.12 |
3XFLAG Peptideje oznaka koja se koristi u istraživanju proteina, a sastoji se od 8 aminokiselina sa sekvencom DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK. Njegova glavna funkcija je da služi kao marker za ekspresiju i prečišćavanje proteina, pružajući pogodno i efikasno sredstvo u istraživanju.
1. Afinitetno pročišćavanje:
Može se koristiti kao oznaka za pročišćavanje proteina, a zahvaljujući svom visokom afinitetu sa anti FLAG antitelima, ciljni protein se može lako pročistiti. Obično se ciljni protein kotransfektuje u ćelije ekspresionim vektorom koji sadrži 3X FLAG PEPTID, a zatim se prečišćava afinitetom korišćenjem anti FLAG antitela da se brzo i efikasno dobije ciljni protein visoke čistoće.
2. Imunološko testiranje:
Zbog svoje visoke imunogenosti, može se koristiti za otkrivanje ekspresije i lokalizacije proteina. Korištenjem specifičnih anti FLAG antitijela, eksperimentalne tehnike kao što su imunobloting i imunofluorescentno bojenje mogu se izvesti kako bi se brzo i precizno otkrio nivo ekspresije i distribucija ciljnih proteina.
3. Filtriranje klonova:
Takođe se može koristiti za praktičnost skrininga proteinskih klonova. U procesu izgradnje vektora ekspresije proteina, povezivanje genske sekvence ciljnog proteina sa sekvencom 3XFLAG može olakšati skrining pozitivnih klonova sa ciljnim proteinom kroz imunološku detekciju i druge metode, čime se ubrzava proces istraživanja funkcije proteina.
4. Imunoprecipitacija:
Može se koristiti i za eksperimente imunoprecipitacije proteina. Vezivanjem proteina koji sadrže 3X FLAG PEPTIDE oznake za anti FLAG antitijela, a zatim korištenjem adsorpcionih materijala kao što su protein A/G agaroza ili magnetne kuglice, ciljni protein i njegovi partneri u interakciji mogu se selektivno precipitirati iz ćelijskih ekstrakata radi proučavanja mreže interakcija proteina.
5. Skrining na droge:
Može se koristiti i u istraživanju skrininga lijekova. Kombinacijom oznake 3X FLAG PEPTIDE sa proteinom od interesa, može se postići visok-skrining proteina. Ova metoda skrininga može se koristiti za otkrivanje novih ciljeva lijeka, procjenu interakcija proteina lijekova itd.
6. Istraživanje funkcije proteina:
Uvođenje oznaka ne utiče značajno na prirodnu strukturu i funkciju proteina, te se stoga može koristiti za proučavanje bioloških funkcija, subćelijske lokalizacije, interakcija i prijenosa signala proteina. Uvođenjem oznake 3X FLAG PEPTIDE, može se provesti dubinsko istraživanje bioloških karakteristika proteina, što pomaže da se otkriju njihovi mehanizmi djelovanja u ćelijskoj biologiji i fiziologiji.
3XFLAG Peptideje peptid koji sadrži 8 aminokiselina, sa sekvencom DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK. Obično se koristi kao proteinska oznaka za prikladno pročišćavanje, detekciju i istraživanje ciljnih proteina. U procesu biosinteze može se pripremiti hemijskom sintezom ili metodama genetskog inženjeringa. Slijede detaljni koraci metoda genetskog inženjeringa:
1. Dizajnirajte i sintetizirajte gene:
Prvo, potrebno je dizajnirati vještački gen koji sadrži sekvencu 3X FLAG PEPTIDE. Ovaj gen bi trebao sadržavati 3X FLAG PEPTIDE sekvencu, kao i odgovarajuće promotere, terminatore i selekcione markere (kao što su geni tolerancije na antibiotike). Dizajn gena treba da uzme u obzir karakteristike i potrebe ekspresije ciljnog domaćina.
2. Kloniranje gena:
Zatim će dizajnirani umjetni geni biti klonirani u odgovarajuće ekspresijske vektore. Obično korišteni vektori uključuju plazmide, virusne vektore, itd. Proces kloniranja obično uključuje sljedeće korake:
-PCR amplifikacija: Korištenje lančane reakcije polimeraze (PCR) za amplifikaciju sekvence ciljnog gena iz šablonske DNK.
-Probava i povezivanje: PCR proizvodi se digestiraju ekspresijskim vektorima pomoću restrikcijskih endonukleaza, a zatim povezuju zajedno pomoću DNK ligaza.
-Transformacija: Transformacija povezanog ekspresionog vektora u bakterijske domaćine kao što je Escherichia coli kako bi se formirao rekombinantni plazmid.
-Identifikacija: Rekombinantni plazmidi su identificirani PCR-om, enzimskom digestijom, sekvenciranjem DNK i drugim metodama kako bi se potvrdilo da je ciljni gen uspješno kloniran u vektor.
3. Ciljni protein ekspresije:
Transficirajte izgrađeni ekspresijski vektor u ciljne ćelije domaćina, kao što su ćelije sisara, ćelije kvasca, ćelije insekata, itd. U ćelijama, ekspresioni vektor se transkribuje u mRNA, a zatim prevodi u proteine. 3X FLAG PEPTID će se eksprimirati zajedno sa ciljnim proteinom kao proteinska oznaka.
4. Ekstrakcija proteina:
Sakupite transficirane ćelije i izvršite fragmentaciju ćelija, centrifugiranje i druge tretmane kako biste dobili ukupni ekstrakt proteina.
5. Prečišćeni protein:
Koristeći tehnike afinitetnog prečišćavanja kao što su imunoprecipitacija i afinitetna hromatografija, ciljni proteini koji sadrže 3X FLAG PEPTIDE oznake su pročišćeni iz ukupnog ekstrakta. Ovo obično uključuje vezivanje anti FLAG antitela za proteine koji sadrže 3X FLAG PEPTID, a zatim njihovo odvajanje pomoću kolona za afinitetnu hromatografiju ili magnetnih kuglica.
6. Identifikujte proteine:
Pročišćeni protein je identificiran i kvantificiran pomoću SDS-PAGE gel elektroforeze, imunoblotinga, masene spektrometrije i drugih tehnologija kako bi se osigurala njegova čistoća i integritet.
Neželjene reakcije
U biomedicinskim istraživanjima i eksperimentima vezanim za proteine, peptidi za označavanje igraju ključnu ulogu. Oni mogu pomoći istraživačima u pročišćavanju, otkrivanju i lociranju ciljnih proteina, uvelike promovirajući razvoj nauke o proteinima.3XFLAG Peptideje uobičajen i široko korišten peptid sa oznakom sastavljen od tri ponovljene sekvence FLAG oznake. Oznaku FLAG prvobitno su dizajnirali Hopp et al. 1988. godine, a kasnije se razvila u varijante kao što je 3XFLAG, koje imaju visok afinitet i specifičnost i mogu se vezati za specifična antitijela, olakšavajući naknadnu izolaciju i identifikaciju. Iako je 3XFLAG donio mnoge pogodnosti u eksperimentima, kao i drugi biološki agensi, može uzrokovati i neke neželjene reakcije.
Neželjene reakcije povezane s imunitetom
Imunogenost
Imunogenost se odnosi na sposobnost supstance da stimuliše imunološki sistem tijela da proizvede imuni odgovor. 3XFLAG, kao segment egzogenog peptida, imunološki sistem tijela može prepoznati kao komponentu koja nije "samostalna", čime se pokreće imuni odgovor. Iako je sekvenca 3XFLAG relativno kratka, u nekim slučajevima može i dalje aktivirati B ćelije i T ćelije, što dovodi do proizvodnje antitijela. Ova antitela se ne vezuju samo za slobodni 3XFLAG, već mogu prepoznati i vezati se za fuzione proteine koji eksprimiraju 3XFLAG oznaku, utičući na normalnu funkciju i distribuciju fuzionog proteina.
Alergijske reakcije
Alergijska reakcija je abnormalni imunološki odgovor uzrokovan preosjetljivošću imunološkog sistema na određene alergene. Pojedinci mogu doživjeti alergijske reakcije kada koriste 3XFLAG za eksperimentiranje ili liječenje. Ozbiljnost simptoma alergijskih reakcija varira. Blagi slučajevi mogu se manifestovati lokalnim simptomima kao što su svrab, osip i eritem, dok teži slučajevi mogu izazvati sistemske alergijske reakcije kao što je anafilaktički šok, karakteriziran naglim padom krvnog tlaka, otežanim disanjem i gubitkom svijesti, što predstavlja ozbiljnu prijetnju po životnu sigurnost.
Alergijske reakcije
Mehanizam alergijskih reakcija uglavnom je vezan za IgE antitela u imunološkom sistemu. Kada tijelo prvi put dođe u kontakt sa 3XFLAG, imunološki sistem ga prepoznaje kao alergen i stimuliše B ćelije da proizvode specifična IgE antitela. Ova IgE antitijela se vežu za površinu mastocita i eozinofila. Kada tijelo ponovo dođe u kontakt sa 3XFLAG, ono se veže za IgE antitijela na površini ćelije, pokrećući mastocite i eozinofile da oslobađaju bioaktivne medijatore kao što su histamin i leukotrieni, što dovodi do pojave alergijskih simptoma.
Rizik od autoimunih bolesti
Dugotrajna ili ponovljena izloženost 3XFLAG-u može povećati rizik od razvoja autoimunih bolesti. Autoimune bolesti se odnose na vrstu bolesti u kojoj imunološki sistem tijela greškom napada vlastita tkiva i organe, što rezultira oštećenjem tkiva i funkcionalnim oštećenjem. 3XFLAG može inducirati imuni sistem da proizvodi unakrsno reaktivna antitijela i T ćelije putem mehanizma molekularne simulacije, gdje je njegova sekvenca aminokiselina slična sekvenci određenih proteina u tijelu.
Ove imunološke ćelije i antitijela ne samo da napadaju strani 3XFLAG, već i nenamjerno oštećuju normalna tjelesna tkiva, što dovodi do autoimunih bolesti. Na primjer, određene autoimune bolesti kao što su sistemski eritematozni lupus i reumatoidni artritis mogu biti povezane s autoimunim reakcijama izazvanim egzogenim supstancama. Iako trenutno nema jasnih dokaza koji bi sugerirali da 3XFLAG direktno uzrokuje autoimune bolesti, ovaj potencijalni rizik se ne može zanemariti.
Utjecaj na ćelijsku funkciju
U nekim eksperimentalnim studijama otkriveno je da visoke koncentracije 3XFLAG mogu imati toksične efekte na stanice. Manifestacije citotoksičnosti uključuju promjene u ćelijskoj morfologiji, narušavanje integriteta ćelijske membrane, promjene u aktivnosti intracelularnih enzima i inhibiciju ćelijske proliferacije. Njegov mehanizam djelovanja može biti povezan s interakcijom između 3XFLAG i ćelijske membrane. Zbog jakog negativnog naboja 3XFLAG,
može se vezati za pozitivno nabijene komponente na ćelijskoj membrani putem elektrostatičkih interakcija, mijenjajući propusnost i fluidnost ćelijske membrane, što dovodi do curenja intracelularnih supstanci ili ulaska štetnih tvari izvana, čime utječe na normalne fiziološke funkcije stanice. Osim toga, 3XFLAG također može ući u unutrašnjost ćelija, ometati signalne puteve, sintezu proteina i druge procese, dodatno pogoršavajući oštećenje ćelija.
Učinci na ćelijske signalne puteve
3XFLAG može ometati intracelularne signalne puteve i uticati na normalne fiziološke aktivnosti ćelija. Stanični signalni put je zajednički izraz za niz molekularnih događaja u kojima stanice reagiraju na vanjske podražaje, regulišući važne procese kao što su rast stanica, diferencijacija i apoptoza. 3XFLAG može ometati normalan prijenos signalnih puteva interakcijom s ključnim molekulima u signalnom putu, mijenjajući nivoe signalne aktivnosti ili ekspresije molekula.
Na primjer, može se vezati za receptore na površini ćelije, kompetitivno inhibirajući vezivanje prirodnih liganada za receptore i blokirajući prijenos signala; Alternativno, može ući u ćeliju i vezati se za proteine za transdukciju signala, utječući na fosforilaciju proteina, defosforilaciju i druge procese modifikacije, ometajući prijenos i pojačavanje signala. Ova interferencija sa ćelijskim signalnim putevima može dovesti do ćelijske disfunkcije, utičući na procese kao što su ćelijska proliferacija, diferencijacija i apoptoza, što zauzvrat može imati štetne efekte na normalan razvoj i funkciju tkiva i organa.
Učinci na ćelijski metabolizam
Ćelijski metabolizam je opći naziv za niz hemijskih reakcija koje se dešavaju unutar ćelija, dajući energiju i materijalnu osnovu za ćelijske životne aktivnosti. 3XFLAG može utjecati na ćelijske metaboličke procese, ometati proizvodnju ćelijske energije i sintezu tvari. Na primjer, može utjecati na funkciju mitohondrija, koji su glavna mjesta za aerobno disanje i proizvodnju energije u stanicama. 3XFLAG može promijeniti propusnost i potencijal mitohondrijalne membrane interakcijom s proteinima ili lipidima na membrani, utičući na funkciju mitohondrijalnog respiratornog lanca i sintezu ATP-a,
što dovodi do nedovoljnog snabdijevanja ćelijske energije. Osim toga,3XFLAG Peptidetakođer može ometati unutarćelijske procese kao što su metabolizam glukoze i metabolizam lipida, utječući na ravnotežu sinteze i razgradnje tvari u stanicama i negativno utjecati na normalne fiziološke funkcije stanica
Često postavljana pitanja
Šta je 3X ZASTAVA?
+
-
3X FLAG Peptide je sintetički peptid od 23 aminokiselinske ostatke. Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp motiv se ponavlja tri puta u peptidu. Osam aminokiselina na C-terminusu čine klasičnu sekvencu FLAG (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys).
Koja je razlika između oznake flag- i 3xflag?
+
-
Flag-oznaka je jedna sekvenca od 8 aminokiselina koja se obično koristi u imunoprecipitaciji, western blot-u i imunofluorescenciji. Nasuprot tome, oznaka 3x Flag- sadrži 22 aminokiseline, što joj daje veći afinitet prema anti-Flag antitijelima, i čini je posebno pogodnom za radne tokove prečišćavanja proteina.
Kako otopiti 3X ZASTAVU?
+
-
Da biste pripremili osnovni rastvor, rastvorite u TBS (50 mM Tris{1}}HCl, pH 7,4, sa 150 mM NaCl) u koncentraciji od 5 mg/mL. Alikvot i čuvati na –20 stepeni. Ponovljeno zamrzavanje i odmrzavanje se ne preporučuje.
Popularni tagovi: 3xflag peptide cas 402750-12-3, dobavljači, proizvođači, fabrika, veleprodaja, kupovina, cijena, rasuti, prodaja