Hej, kolege entuzijasti nauke! Kao dobavljačIPTG prah, u posljednje vrijeme dobijam mnogo pitanja o tome kako ovaj zgodni mali prah utječe na ekspresiju proteina u različitim sastavima medija. Dakle, mislio sam da duboko zaronim u ovu temu i podijelim ono što sam naučio.
Iptg Powder
Šifra proizvoda: BM-2-5-133
Naziv: Iptg
CAS broj: 367-93-1
MF: C9H18O5S
HS kod: 29389090
MW: 238,3
EINECS br.: 206-703-0
Proizvođač: BLOOM TECH Wuxi Factory
Analiza: HPLC, LC-MS, HNMR
Glavno tržište: SAD, Australija, Brazil, Japan, Njemačka, Indonezija, Velika Britanija, Novi Zeland, Kanada itd.
Tehnološka podrška: R&D Dept.-4
Mi obezbjeđujemoIPTG prah, molimo pogledajte sljedeću web stranicu za detaljne specifikacije i informacije o proizvodu.
proizvod:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/api-researching-only/iptg-powder-cas-367-93-1.html
Prvo, hajde da pričamo o tome šta je IPTG prah. IPTG, ili izopropil β-D-1-tiogalaktopiranozid, je dobro poznati induktor u molekularnoj biologiji. Koristi se za uključivanje ekspresije gena koji su pod kontrolom lac operona. Kada dodate IPTG u svoju kulturu, on oponaša djelovanje alolaktoze, prirodnog induktora, i vezuje se za lac represor. Ovo vezivanje izaziva konformacionu promenu u represoru, sprečavajući ga da se veže za operaterski region DNK. Kao rezultat toga, RNA polimeraza može slobodno transkribovati gene nizvodno od operatera, što dovodi do ekspresije proteina.
LB Medium
LB (Luria - Bertani) podloga je jedna od najčešće korištenih podloga u mikrobiologiji. Bogat je hranjivim tvarima i pruža odlično okruženje za rast bakterija. Kada koristite IPTG u LB medijumu, obično dobijate prilično dobru indukciju ekspresije proteina. Bakterije imaju dosta resursa za rast i sintezu proteina kada IPTG pokrene ekspresiju gena.
Međutim, postoje neki nedostaci. Ponekad bakterije mogu rasti prebrzo u LB mediju, a kultura visoke gustoće može dovesti do problema kao što su ograničenje kisika i nakupljanje toksičnih nusproizvoda. Ovo može uticati na kvalitet i količinu izraženog proteina. Također, bogati nutrijenti u LB-u ponekad mogu uzrokovati da bakterije proizvode mnogo drugih proteina zajedno sa ciljnim proteinom, što proces pročišćavanja čini izazovnijim.
M9 Minimalni srednji
M9 minimalni medij je definiraniji medij u odnosu na LB. Sadrži samo esencijalne nutrijente za rast bakterija, kao što su soli, izvor ugljika (obično glukoza) i izvor dušika. Kada koristite IPTG u M9 minimalnom mediju, ekspresija proteina može biti strože regulirana.
Budući da bakterije imaju manje resursa u M9, one rastu sporije. Ova sporija stopa rasta može biti korisna za neke proteine, posebno one koje je teško eksprimirati ili su skloni pogrešnom savijanju. Bakterije imaju više vremena da pravilno presavijaju proteine, što rezultira većim prinosom pravilno presavijenih i funkcionalnih proteina. Međutim, budući da je rast sporiji, može biti potrebno više vremena da se postigne optimalna gustina ćelija za indukciju, a ukupni prinos proteina može biti niži u poređenju sa LB medijumom.
Auto - indukcioni mediji
Auto-indukcijski mediji su relativno nov razvoj u ovoj oblasti. Ovi mediji su dizajnirani da automatski induciraju ekspresiju proteina u odgovarajuće vrijeme tokom ciklusa rasta bakterija. Sadrže mješavinu izvora ugljika, kao što su glukoza i laktoza.
Na početku faze rasta, bakterije troše glukozu, koja potiskuje lac operon. Kako se glukoza iscrpljuje, bakterije počinju koristiti laktozu. Laktoza može djelovati kao prirodni induktor, slično kao IPTG. Osim toga, još uvijek možete dodati malu količinu IPTG-a da pojačate indukciju.
Prednost upotrebe IPTG-a u auto-indukcijskim medijima je da pojednostavljuje proces indukcije. Ne morate pratiti gustinu ćelija i dodati IPTG u pravo vrijeme. Također, auto-indukcijski mediji ponekad mogu dovesti do većeg prinosa proteina i boljeg kvaliteta proteina u poređenju sa tradicionalnim medijima.
Utjecaj sastava medija na koncentraciju IPTG
Optimalna koncentracija IPTG-a za ekspresiju proteina može varirati ovisno o sastavu medija. U LB mediju, možda će vam trebati relativno visoka koncentracija IPTG-a (obično oko 0,1 - 1 mM) da biste postigli maksimalnu indukciju. To je zato što bogati nutrijenti u LB-u mogu u određenoj mjeri ometati vezivanje IPTG-a za lac represor.
U minimalnom mediju M9, niža koncentracija IPTG-a (oko 0,01 - 0,1 mM) može biti dovoljna. Jednostavnije okruženje u M9 omogućava IPTG-u da radi efikasnije. Za auto-indukcijske medije, potrebna koncentracija IPTG-a je obično još niža, jer laktoza u mediju također doprinosi indukciji.
Poređenje IPTG-a sa drugim induktorima
Postoje i drugi induktori dostupni na tržištu, ali IPTG ima neke jedinstvene prednosti. Na primjer, laktoza je prirodni induktor, ali je mogu metabolizirati bakterije. To znači da se koncentracija laktoze u mediju može mijenjati tokom vremena, što otežava preciznu kontrolu procesa indukcije. IPTG se, s druge strane, ne metaboliše od strane bakterija, tako da njegova koncentracija ostaje relativno stabilna u mediju.
Drugi induktor je arabinoza, koja se koristi za indukciju gena pod kontrolom ara operona. Međutim, ara operon ima drugačiji regulatorni mehanizam u odnosu na lac operon. IPTG je posebno dizajniran za lac operon, koji je jedan od najčešće korištenih sistema za ekspresiju proteina.
Ako ste zainteresovani za druge hemijske proizvode za vaše istraživanje, mi takođe nudimoFenibut HCL u prahu 25kg,Kokarboksilaza CAS 154 - 87 - 0, iDoksiciklin hiklat u prahu CAS 24390 - 14 - 5. Ovi proizvodi mogu biti korisni u različitim istraživačkim aplikacijama.
Zaključak
U zaključku, efekat IPTG praha na ekspresiju proteina je pod velikim uticajem sastava medija. Različiti mediji nude različite prednosti i nedostatke, a izbor medija ovisi o specifičnom proteinu koji želite izraziti i vašim eksperimentalnim zahtjevima. Bilo da koristite klasični LB medij, definiraniji minimalni medij M9 ili inovativni auto-indukcijski medij, IPTG može igrati ključnu ulogu u pokretanju ekspresije proteina.
Ako ste na tržištu za visokokvalitetni IPTG prah ili bilo koji od drugih proizvoda koje sam spomenuo, ne ustručavajte se kontaktirati za pregovore o kupovini. Tu smo da vam pružimo najbolje proizvode i podršku za vaša istraživanja.
Reference
Studier, FW (2005). Proizvodnja proteina auto-indukcijom u kulturama visoke gustine mućkanja. Ekspresija i pročišćavanje proteina, 41(1), 207 - 234.
Sambrook, J., & Russell, DW (2001). Molekularno kloniranje: laboratorijski priručnik. Cold Spring Harbor Laboratory Press.
Baneyx, F. (1999). Ekspresija rekombinantnog proteina u Escherichia coli. Biotechnology Advances, 17(4), 447 - 496.